干货分享 | 疏水层析介质原材料检测

  凝胶、亲和、离子、疏水、多模式等生物大分子层析介质，是通过独特的凝胶微球表面改性技术合成的。要生产质量高、批间差小的产品，除了严格控制合成工艺外，最重要的就是原材料的纯度了。原材料的纯度包括两个方面：一、主成份含量；二、杂质种类。

我们在做原材料检测时，发现各种复杂情况：有的厂商提供的检测报告是用滴定方法检测的，测定的是其中的无机离子，结果没有意义；有的厂商提供的液相色谱条件，原材料检测出来不是单一物质，而是几种物质的混合物。

举几个简单的例子：

例1.用色谱法取代厂商的滴定法

比如其中一种原材料，是有机胺的盐酸盐，厂商A提供的方法是滴定其中的氯离子，这种方法是工业合成上用来测定转化率的，也就是说反应后，一个氯的取代基转化成一个氯离子，滴定氯离子确实可以计算出转化率。但是对于我们用原材料的买家来说没有任何意义，说白了，如果原料中混了氯化钠，用滴定的方法，也可以当成主成份。原材料的检测最好是分离后再分析。我们80%的原材料用液相色谱检测（图1），20%用气相色谱（图2）。

图1 赛默飞VC高液液相色谱仪-奥泰蒸发光检测器

图2 福立气相色谱仪

例2.改进色谱条件，提高保留、提升分离度

有的原材料，厂商A用液相色谱检测，色谱柱是C18柱，液动相中加三氯乙酸进行分离，试用后发现，在C18反相色谱柱上根本没有保留，大约2min就出峰了，如图3。这样杂质跟主成分根本分不开，这个漂亮的正态峰，实际上是主成分和杂质一起在死时间时出峰，没有意义。

图3 厂商A的检测方法

于是，我们自己建立了这个原材料的检测方法。经过多次实验，我们选定Ultimate®HILIC 系列液相色谱柱，这是一种新型的两性离子键合硅胶填料的HILIC(Hydrophilic Interaction Chromatography）亲水作用色谱柱。适合于大多数极性化合物的分离，比如亲水性的小分子目标物以及碱性化合物都可以分离，流动相—般用乙腈和水即可。

我们用Ultimate®HILIC 系列液相色谱柱，建立新的分离分析方法后，如图4所示，可以看出主成分保留时间增加，杂质得到很好的分离。

图4 HILIC两性柱色谱图

例3.气相色谱-质谱联用定性原材料

一般来说，用于疏水类介质的原材料沸点低，适合用气相检测。但我们遇到一个特殊情况：某疏水配基原材料，我们先跟厂商要了样品，打小样，发现合格。当进大货的时候，再用气相色谱检测的时候发现跟样品差别很大。样品出一个主峰（图5），保留时间5.627min，含量87%，大货出三个峰（图6），保留时间也对不上。

图5 小样（合格品）气相谱图

图6 大货（不合格品）气相色谱图

我们又用气相色谱-质谱联用仪（图7）检测，发现小样确实是疏水配基原材料这个物质，但是大货三个峰中没有一个是疏水配基原材料，只是基团相同。这种情况就会造成键合相错误。由于及时查出原材料问题，避免了生产损失。

图7 Agilent气相色谱-质谱联用仪

以上是部分原材料的检测心得，还有许多原材料检测的情况，在以后的文章再慢慢跟大家分享，尽请期待！

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关于我们

    武汉汇研生物科技有限公司成立于2013年9月，是集生物大分子层析介质研发、生产、销售于一体的高新技术企业。公司拥有大批高科技人才，在研发和创新能力方面投入了大量资金，拥有多项专利技术。通过独特的凝胶微球表面改性技术，我们能够生产凝胶、亲和、离子、疏水、多模式等五大类100多种生物大分子层析介质产品，广泛应用于疫苗、抗体、重组蛋白、基因治疗等领域。在层析介质的基础上，我们同时还提供特色的定制化填料开发服务和生物大分子纯化工艺开发服务。

      汇研生物目前已经成功实现了单条3000升琼脂糖（多糖）微球生产线的投产，单批次微球产量超过1000升，产量及质量位居国产层析填料行业前列。