干货分享 | 搭建蛋白纯化工艺时需考虑的因素

    一般来说，蛋白纯化工艺由层析工艺搭配膜工艺来完成，一个好的纯化工艺需要各个工序完美配合和衔接，最终获得符合要求的目标产物。在制定纯化工艺时，层析工艺和膜工艺作为两大步骤都很重要，通过相互配合共同形成完美工艺。

   在制定纯化工艺时需要对纯化目标产物有充分的了解，根据目标产物的性质特点选择合适的纯化策略。常规的膜工艺一般分为深层过滤、除菌过滤、除病毒过滤和切向流过滤等；常规的层析工艺一般分为亲和层析、阴离子层析、阳离子层析、疏水层析和复合模式层析等；层析工艺又分为两种模式：结合洗脱模式和流穿模式。在纯化工艺设计中，膜工艺与纯化工艺如何搭配？层析工艺模式如何选择？不同的设计思路可能都会获得一条符合要求的工艺路线，但时间、人力及便捷性可能大不相同。

膜工艺中较为关键的参数为压力、流速和载量，可根据实际需求进行相关工艺参数的优化，获得较好过滤性能。

表1  膜工艺的选择

表2  层析中结合洗脱模式和流穿模式的选择

    （根据常规纯化思路推荐）

   纯化中一般根据目标产物的特性进行选择合适层析工艺和模式，通过工艺参数优化可显著提高每个层析工艺纯化性能；最后通过合适组合形成整套合适工艺。

下文以纯化带有Fc结构，分子量100kD，等电点8.0的蛋白产物为例，通过组合深层过滤、除菌过滤、切向流浓缩、亲和层析、阴离子层析、阳离子层析、疏水层析和凝胶过滤层析具体分析工艺搭配的注意事项。为了方便探讨每步骤的作用尽可能多的增加工艺步骤，实际操作可能仅采用部分工艺即可满足纯化需求。

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