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SP Focurose HP是强阳离子交换介质，适用于蛋白、多肽、核酸等所有带电的生物分子的分离纯化。小颗粒设计，多应用样品的精细纯化。
1 产品介绍
特点：
a.容易放大。
b.高分辨率。
c.高化学耐受性。
d.便于维护。
表1：SP Focurose HP 性能参数
基质 | 6%高度交联的琼脂糖 |
粒径范围 | 25-45µm |
平均粒径 | 35±5µm |
介质类型 | 强阳离子交换 |
带电基团 | -SO3- |
离子载量 | 0.15-0.20mmol H+/ml介质 |
操作压力 | ≤0.3MPa |
流速 | ≥150cm/h |
pH稳定性 | 4-12（工作）/4-13（长期）/ 3-14（短期） |
化学稳定性 | 常用缓冲液、1.0M氢氧化钠、8M 尿素、6M 盐酸胍、70%乙醇 |
避免使用 | 氧化剂、阳离子型去污剂、阳离子型缓冲液 |
贮存溶液 | 0.2M NaAc，20%乙醇 |
贮存温度 | 4-30℃ |
2 选择指导
2.1 离子交换介质的选择
图1：离子交换介质的选择
说明：
a.当目标物所在溶液的pH˂目标物的等电点时，选择阳离子交换介质。
b.当目标物所在溶液的pH˃目标物的等电点时，选择阴离子交换介质。
c.所使用溶液的pH应该在离子交换介质的使用pH范围以内。
2.2 缓冲溶液的选择
表2：阴离子交换缓冲液
pH范围 | 缓冲盐 | 浓度（mM） | 平衡离子 | pKa(25℃) |
4.3-5.3 | N-Methylpiperazine | 20 | Cl- | 4.75 |
4.8-5.8 | Piperazine | 20 | Cl-或HCOO- | 5.33 |
5.5-6.5 | L-Histidine | 20 | Cl- | 6.04 |
6.0-7.0 | bis-Tris | 20 | Cl- | 6.48 |
6.2-7.2 | bis-Tris propane | 20 | Cl- | 6.65 |
7.3-8.3 | Triethanolamine | 20 | Cl-或CH3COO- | 7.76 |
7.6-8.6 | Tris | 20 | Cl- | 8.07 |
8.0-9.0 | N-Methyl-diethanolamine | 20 | SO42- | 8.52 |
8.0-9.0 | N-Methyl-diethanolamine | 50 | Cl-或CH3COO- | 8.52 |
8.4-9.4 | Diethanolamine | 50 | Cl- | 8.88 |
8.4-9.4 | Propane 1,3-Diamino | 20 | Cl- | 8.88 |
8.6-9.6 | bis-Tris propane | 20 | Cl- | 9.10 |
9.0-10.0 | Ethanolamine | 20 | Cl- | 9.50 |
9.2-10.2 | Piperazine | 20 | Cl- | 9.73 |
10.0-11.0 | Propane 1,3-Diamino | 20 | Cl- | 10.55 |
10.6-11.6 | Piperidine | 20 | Cl- | 11.12 |
表3：阳离子交换缓冲液
pH范围 | 缓冲盐 | 浓度（mM） | 平衡离子 | pKa(25℃) |
1.4-2.4 | Maleic acid | 20 | Na+ | 1.92 |
2.6-3.6 | Methyl malonic acid | 20 | Na+或Li+ | 3.07 |
2.6-3.6 | Citric acid | 20 | Na+ | 3.13 |
3.3-4.3 | Lactic acid | 50 | Na+ | 3.86 |
3.3-4.3 | Formic acid | 50 | Na+或Li+ | 3.75 |
3.7-4.7 | Succinic acid | 50 | Na+ | 4.21 |
4.3-5.3 | Acetic acid | 50 | Na+或Li+ | 4.75 |
5.1-6.1 | Succinic acid | 50 | Na+ | 5.64 |
5.2-6.2 | Methyl malonic acid | 50 | Na+或Li+ | 5.76 |
5.6-6.6 | MES | 50 | Na+或Li+ | 6.27 |
6.7-7.7 | Phosphate | 50 | Na+ | 7.20 |
7.0-8.0 | HEPES | 50 | Na+或Li+ | 7.56 |
7.8-8.8 | BICINE | 50 | Na+ | 8.33 |
说明：
a.按照表2和表3选择缓冲溶液的种类和浓度。
b.错误的缓冲液（种类和浓度）会干扰分离效果(如分离度、载量、pH波动等)。
c.所使用缓冲液的pH应该在离子交换介质的使用pH范围内。
d.使用分析纯或者更高纯度的缓冲液。
e.在溶液配制后，须经过滤（平均粒径<45µm，用0.22µm过滤；45µm<平均粒径<165µm，用0.45µm过滤；平均粒径>165µm，用0.8µm过滤）和脱气处理（超声或负压）。
3 样品的制备
样品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液稀释或透析/超滤/G25进行缓冲液置换。
样品过滤（平均粒径<45µm，用0.22µm过滤；45µm<平均粒径<165µm，用0.45µm过滤；平均粒径>165µm，用 0.8µm过滤）。
4 纯化流程（以XK16/10为例）
采用液滴对液滴（避免引入气泡）的方式将柱子连接到层析系统上。
用平衡液以3ml/min的流速冲洗5CV（CV指柱床体积，下同）。
用洗脱液以3ml/min的流速冲洗5CV。
用平衡液以3ml/min的流速冲洗10CV。
将样品以3ml/min的流速上样。
用平衡液以3ml/min的流速冲洗10CV。
用洗脱液以3ml/min洗脱5CV或20CV(根据前期筛选实验数据，采用阶梯式洗脱5CV/线性梯度洗脱20CV)。
用再生液以3ml/min的流速冲洗5CV。
备注：再生液=平衡液+1M NaCl，其它组分不变。
5 放大
保持柱床高度不变
5.2 保持线性流速不变
备注：若实际情况和实验室数据有偏差，可以维持停留时间不变。
6 维护
6.1平衡
柱子装填完成后，用平衡液以60cm/h的流速冲洗5CV或冲洗至电导和pH值恒定。
6.2再生
每次分离纯化后，用再生液以60cm/h的流速冲洗5CV或冲洗至电导和pH值恒定。
6.3在位清洗
在位清洗用于清洗再生没有清洗干净的物质，例如脂类、沉淀物、变性蛋白。
a.强离子结合蛋白
用2.0M NaCl以60cm/h的流速反向冲洗5CV。
b.沉淀物、疏水结合蛋白、脂蛋白
用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向冲洗5CV。
c.脂类、强疏水蛋白。
以30cm/h速度，先用纯化水和70%乙醇或30%异丙醇进行梯度冲洗（5个柱床体积），再用70%乙醇或30%异丙醇冲洗5个柱床体积，最后用70%乙醇或30%异丙醇和纯化水进行梯度冲洗5个柱床体积。
6.4消毒
用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向冲洗5CV。
6.5灭菌
将介质置换到0.5M NaCl ,pH 7.0的溶液中进行高压灭菌。
6.6保存
介质在0.2M NaAc 、20%乙醇中4-30℃保存。
7 订购信息
表4：订购信息表
产品 | 规格 | 货号 |
SP Focurose HP | 25ml | HL060201025M |
SP Focurose HP | 100ml | HL060201100M |
SP Focurose HP | 500ml | HL060201500M |
SP Focurose HP | 1L | HL060201001L |
SP Focurose HP | 5L | HL060201005L |
SP Focurose HP | 20L | HL060201020L |
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