为确保产品的性能和无忧的操作，使用前请仔细阅读本手册，有任何疑问请咨询本公司售后技术支持或当地的销售人员（联系方式见附录）。

1.产品介绍

    Focore 700是高刚性琼脂糖内部核球上键合辛胺功能基团，高刚性琼脂糖核球外部为惰性壳层，排阻极限为700KDa。在较高电导条件下，大于700KDa的目标物通过微球之间的空隙流穿，属于凝胶过滤的原理对目标物进行纯化；小于700KDa的杂质进入微球内部核球后，通过核球内部的辛胺复合功能基团进行吸附结合，属于离子交换和疏水多模式作用，可以去除目标物中的宿主蛋白等杂质，从而达到对目标物流穿杂质结合的分离纯化目的。Focore 700主要用于病毒、病毒样颗粒、病毒载体等流穿模式的分离纯化。

特点：

a.快速、简单（一步纯化）。

b.与凝胶过滤相比，杂质被吸附在内部核球中，具有更高的上样体积，有助于提高纯化生产效率。

c.与复合型层析相比，外部惰性壳层对目标物没有吸附结合，回收率高，有助于保持生物分子的生物活性。

表1：性能参数

2.选择指导

2.1 pH的选择

a.当杂质所在溶液的pH˃杂质的等电点pI。

b.所使用溶液的pH应该在样品稳定pH范围以内。

2.2 缓冲溶液的选择

表2：推荐缓冲液

说明：

a.选择的缓冲液和盐可能会干扰性能。

b.电导调节可以通过添加盐或改变缓冲液的浓度。

c.在溶液配制后，用0.22µm过滤和脱气处理（超声或负压）。

3 样品的制备

样品所在溶液要和平衡液保持一致。

样品离心过滤。

4 纯化流程

采用液滴对液滴（避免引入气泡）的方式将柱子连接到层析系统上。

用平衡液以5ml/min的流速冲洗5CV（CV指柱床体积，下同）。

用洗脱液以5ml/min的流速冲洗5CV。

用平衡液以5ml/min的流速冲洗10CV。

将样品以5ml/min的流速上样。

用平衡液以5ml/min的流速冲洗10CV。

用洗脱液以5ml/min洗脱5CV或20CV(根据前期筛选实验数据，采用阶梯式洗脱5CV/线性梯度洗脱20CV)。

用再生液以5ml/min的流速冲洗5CV。

5 放大

5.1 保持柱床高度不变

5.2 保持线性流速不变

5.3 备注：若实际情况和实验室数据有偏差，可以维持样品保留时间不变。

6 维护

6.1平衡

柱子装填完成后，用平衡液以60cm/h的流速冲洗5CV或冲洗至电导和pH值恒定。

6.2洗脱

每次分离纯化后，用30%异丙醇，1M NaOH溶液以60cm/h的流速冲洗5CV或冲洗至电导和pH值恒定。

6.3在位清洗

在位清洗用于清洗再生没有清洗干净的物质，例如脂类、沉淀物、变性蛋白。

a.强离子结合蛋白

用2.0M NaCl以60cm/h的流速反向冲洗5CV。

b.沉淀物、疏水结合蛋白、脂蛋白

用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向冲洗5CV。

c.脂类、强疏水蛋白。

用1.0M NaOH，30%异丙醇以30cm/h的流速反向冲洗5CV

6.4消毒

用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向冲洗5CV。

6.5灭菌

将介质置换到0.5M NaCl ,pH 7.0的溶液中进行高压灭菌。

6.6保存

介质在20%乙醇中4-30℃保存。

7.应用案例

7.1预装柱

Focore 700，1ml预装柱；

7.2缓冲液

平衡液：20mM PB，0.15M NaCl，pH7.38；

洗脱液：30%异丙醇，1M NaOH；

溶液配制完成经0.45um水相滤膜过滤。

7.3狂犬病毒样品预处理

样品上样前需经过0.45um过滤。

7.4纯化过程

纯化过程中上样流速为0.33ml/min。

7.5纯化图谱

7.6总蛋白标准曲线

7.7蛋白去除率

备注：蛋白去除率=[1-M各组分/M(L+E1+E2)]*100%.

7.8 ELISA抗原效价

a.消除空白后判定结果：将各孔测得A值减去空白孔A值；

b.将自备标准品和待测疫苗样品稀释度及对应A值（消除空白后）分别取对数值；

c.以稀释度对数为横坐标，以A值对数为纵坐标做散点图；

d.得到自备标准品和待测疫苗样品的散点图及一次直线方程（通过添加趋势线获得），计算各趋势线方程纵轴截距L；

e.计算疫苗样品效力：若自备标准品对应的国际单位为M（IU/ml），则待测疫苗样品的效力为：（L样品/L标准品）*M（IU/ml）

备注：病毒回收率=OD450(L)/OD450(Y)*100%

8.常见问题

表3：常见问题及解决方案

9.订购信息

表4：订购信息表

备注：大规格包装产品或其它产品购买，请咨询本公司当地销售或售前技术支持。