为确保产品的性能和无忧的操作，使用前请仔细阅读本手册，有任何疑问请咨询本公司售后技术支持或当地的销售人员（联系方式见附录）。
1.产品介绍
arProtein A Focurose HR适用于分离纯化腹水、细胞培养上清、血清来源的单抗、多抗及Fc标签蛋白等。
特点：
a.快速、简单（一步纯化）。
b.载量高、流速快、易于放大。
c.与Protein G相比，结合力相对较弱，更容易洗脱，也能更好的维持抗体的滴度（见表2）。
表1：介质性能参数
基质 | 高刚性琼脂糖 |
粒径范围 | 45-165µm |
平均粒径 | 70±5µm |
结合载量 | ≥50mg(人IgG)/ml(介质) |
pH稳定性 | 3-9(长期) 2-10(短期) |
化学稳定性 | 所有常用缓冲溶液中稳定 70%乙醇、6M盐酸胍（8天）,0.5M 氢氧化钠（2天） |
流速 | ≦500cm/h |
操作压力 | ≤0.5MPa |
贮存溶液 | 20%乙醇 |
贮存温度 | 4-8℃ |
备注：
1.介质的结合载量会因样本的来源和亚型的变化而变化。
2.介质如果长时间浸泡在洗脱液中，会导致配基水解，最终影响介质载量。
表2：Protein A和 Protein G与不同种属IgG的结合强度
种类 | 亚类 | Protein A | Protein G |
人 | IgA | 可变 | - |
IgD | - | - | |
IgE | - | - | |
IgG1 | ++++ | ++++ | |
IgG2 | ++++ | ++++ | |
IgG3 | - | ++++ | |
IgG4 | ++++ | ++++ | |
IgM | 可变 | - | |
豚鼠 | IgG1 | ++++ | ++ |
IgG2 | ++++ | ++ | |
仓鼠 | / | + | ++ |
小鼠 | IgG1 | + | ++++ |
IgG2a | ++++ | ++++ | |
IgG2b | +++ | +++ | |
IgG3 | ++ | +++ | |
IgM | 可变 | - | |
大鼠 | IgG1 | - | + |
IgG2a | - | ++++ | |
IgG2b | - | ++ | |
IgG3 | + | ++ | |
兔 | / | ++++ | +++ |
禽蛋黄 | IgY | - | - |
狗 | / | ++ | + |
猪 | / | +++ | +++ |
马 | / | ++ | ++++ |
牛 | / | ++ | ++++ |
绵羊 | / | -/+ | ++ |
山羊 | / | - | ++ |
猴子 | / | ++++ | ++++ |
骆驼 | / | - | + |
熊 | / | - | + |
“-”：不结合 “+”：弱结合 “++”：结合 “+++”：中等结合 “++++”：强结合 | |||
2.溶液制备
平衡液：0.02M PB、0.15M NaCl， pH 7.0-7.4。
洗脱液：0.1M 柠檬酸缓冲液，pH 3.0。
中和液：1.0M Tris-HCl，pH 9.0。
3.样品制备
3.1样品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液进行裂解、透析/超滤/G25进行缓冲液置换。
3.2样品过滤（平均粒径<45µm，用0.22µm过滤；45µm<平均粒径<165µm，用0.45µm过滤；平均粒径>165µm，用 0.8µm过滤）。
4.纯化流程（以XK16/10为例）
4.1采用液滴对液滴（避免引入气泡）的方式将柱子连接到层析系统上。
4.2用纯化水以5ml/min的流速冲洗5个CV。
4.3用平衡液以5ml/min的流速冲洗10个CV。
4.4将样品以5ml/min的流速上样。
4.5用平衡液以5ml/min的流速冲洗至紫外吸收值平稳（10-15个CV）。
4.6用洗脱液以5ml/min的流速洗脱10CV。
4.7用纯化水以5ml/min的流速冲洗5个CV。
4.8用20%乙醇以5ml/min的流速冲洗5个CV。
5.清洗
5.1用O.1M NaOH缓慢冲洗不低于5CV
5.2用纯化水冲洗至pH中性。
5.4用20%乙醇冲洗3CV，4℃保存。
6.常见问题
表3：常见问题及解决方案
问题 | 可能原因 | 解决方案 |
纯化时目标物不与介质结合 或结合量较低 | 1.上样量过载 | 降低上样量 |
2.上样流速过快 | 降低上样流速 | |
3.蛋白或脂类在介质中聚集 | 及时有效地清洗介质或更换新的介质 | |
4.目标物和介质结合力弱 | 确认IgG来源及亚型，选择正确的介质 | |
5.纯化时选择的缓冲液不合适 | 确认样本中的pH，结合力弱的目标物可以通过调高pH（8-9）和增加盐浓度（1-3M NaCl）来提高样本和介质的结合力 | |
洗脱时没有收集到目标物 或只收集到少量目标物 | 1.目标物没有与介质结合或结合量较少 | 先确认目标物是否与介质结合 |
2.洗脱条件不合适 | 降低洗脱液pH至2.5-3.0 | |
3.洗脱时间不够 | 降低流速，延长洗脱液的保留时间 | |
4.洗脱体积过小 | 加大洗脱体积 | |
目标物纯度较低
| 1.样品没有经过前处理 | 根据样品的来源，上柱前必须要经过离心、过滤或稀释 |
2.样品粘度过高 | 用平衡液适当的稀释样品，降低样品粘度和浓度。 | |
3.洗杂不彻底 | 加大洗杂体积直至基线平稳并与平衡液一致 | |
4.杂质蛋白或脂类在介质中聚集沉淀 | 及时有效地清洗介质 | |
5.目标物出现降解 | 注意样本纯化前后的保存条件，不得在高温、过酸、过碱条件长时间放置 | |
6.柱料装填效果不佳 | 重新装填或购买 | |
7.分离柱顶部有较大储样体积 | 重新装柱或降低储样体积 | |
8.介质中有微生物生长 | 介质使用完后，请及时正确保存介质 | |
介质载量下降 | 1.上样流速过快 | 降低上样流速 |
2.蛋白或脂类在介质中聚集，导致载量下降 | 及时清洗介质 | |
3.使用次数过多，配基逐渐脱落 | 更换新介质 | |
色谱峰上升过陡 | 介质装填过紧 | 重新装柱 |
色谱峰上升过缓或拖尾 | 介质装填太松 | 重新装柱 |
柱床有裂缝或干涸 | 出现泄露或大体积气泡引入 | 检查管路是否有泄露或气泡，重新装柱 |
液流较慢 | 1.蛋白或脂类聚集 | 及时清洗介质或滤膜 |
2.分离柱中微生物生长 | 所用试剂必须经过过滤和脱气； 样品上柱前必须离心或过滤 |
7.订购信息
表4：订购信息表
产品 | 规格 | 货号 |
arProtein A Focurose HR | 25ml | HQ320827025M |
arProtein A Focurose HR | 100ml | HQ320827100M |
arProtein A Focurose HR | 500ml | HQ320827500M |
arProtein A Focurose HR | 1L | HQ320827001L |
arProtein A Focurose HR | 5L | HQ320827005L |
arProtein A Focurose HR | 20L | HQ320827020L |
备注：大规格包装产品或其它产品购买，请咨询本公司当地销售或售前技术支持。
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