为确保产品的性能和无忧的操作,使用前请仔细阅读本手册,有任何疑问请咨询本公司售后技术支持或当地的销售人员(联系方式见附录)。
1.产品介绍
PS Focurose HPL是一种特定的亲和填料,适用于部分病毒、病毒样颗粒以及某些特定的抗原和蛋白(见表2)的分离纯化。
特点:
a.快速、简单(一步纯化)。
b.载量高。
c.易于放大。
表1:性能参数
介质 | PS Focurose HPL |
基质 | 高刚性琼脂糖 |
粒径范围 | 45-165µm |
平均粒径 | 90±5µm |
溶菌酶载量 | ≥3mg/ml介质 |
pH稳定性 | 5-12(长期) 5-12(短期) |
操作压力 | ≤0.3MPa |
流速 | ≧300cm/h |
贮存溶液 | 20%乙醇 |
贮存温度 | 4-30℃ |
表2:PS Focurose HPL适用性
Viruses | Viral/Microbial Agents |
Rabies Influenza Japanese Enchephalitis Feline Leukemia Feline Herpes Feline Calicivirus Respiratory Syncytial Virus Human Herpes Simplex Human Measles Human Parainfluenza | Herpes Simplex gA and gB Glycoprotein Subunits Hepatitis B Surface Antigen Filamentous Hemagglutinin from B. pertussis Leucocytosis Promoting Factor Hemagglutinin |
2.溶液配制
平衡液:0.01M PB,调节pH 7.2,4-8℃保存。
洗脱液:0.01M PB、1.0M NaCl,调节pH 7.2,室温保存。
备注:平衡液pH为7.2±0.2,在平衡液中可经添加0.1M NaCl抑制少量杂质的吸附,取决样品特性;洗脱时可以把NaCl可增加到2M来提高洗脱能力。
3.样品的制备
a.样品所在溶液盐的组分及pH必须和平衡液保持一致,可以通过用平衡液稀释或透析、超滤、G25进行缓冲液置换处理。
b.样品过滤(粒径≤45µm用0.22µm过滤、粒径≤165µm用0.45µm过滤、粒径≤300µm用0.8µm过滤,避免堵塞离子交换介质)。
备注:不建议直接用强酸或强碱调整样品溶液的pH,可能会出现目标物的降解和失活。
4.纯化流程(以XK16/10为例)
4.1用纯化水以5ml/min冲洗5CV。
4.2用平衡液以5ml/min冲洗10CV。
4.3将样品以2.5ml/min上样,上样完成后用平衡液进行清洗直至基线平稳。
4.4用洗脱液以5ml/min洗脱10CV,并收集洗脱液。
4.5用纯化水以5ml/min冲洗5CV。
4.6用保存液以5ml/min冲洗后保存。
5.清洗(以XK16/10为例)
清洗后可以去除一些强结合性物质(例如一些强结合的蛋白、变性蛋白、脂类等),从而达到恢复介质的优良性能(例如载量、流动性、柱效等)。
建议每使用5-10次后进行一次清洗,具体清洗频率需根据纯化的初始样品的洁净度进行调整。
5.1用3M NaCl以1ml/min的流速冲洗10CV。
5.2用0.1M NaOH以1ml/min的流速冲洗20CV。
5.3用3M NaCl以1ml/min的流速冲洗10CV。
5.4用纯化水以5ml/min的流速冲洗10CV。
5.5用保存液以5ml/min的流速冲洗5CV。
6.常见问题
表3:常见问题及解决方案
问题 | 可能原因 | 解决方案 |
纯化时目标物不与介质结合 或结合量较低 | 1.上样量过载 | 降低上样量 |
2.上样流速过快 | 降低上样流速 | |
3.蛋白或脂类在介质中聚集 | 及时有效地清洗介质或更换新的介质 | |
4.目标物不带电或与介质带同样的电荷 | 筛选合适的结合缓冲液 | |
5.样本或平衡液中盐浓度和pH不正确 | 检查样品和平衡液中的电导和pH | |
6.选用了错误的缓冲液 | 参考缓冲液选择表 | |
7.样品中加入了不合适的去污剂 | 检查样品中是否有不合适的去污剂 | |
洗脱时没有收集到目标物 或只收集到少量目标物 | 1.目标物没有与介质结合或结合量较少 | 先确认目标物是否与介质结合 |
2.洗脱条件不合适 | 洗脱液洗脱能力不够,加大盐浓度和调整洗脱液pH | |
3.洗脱时间不够 | 降低流速,延长洗脱液的保留时间 | |
4.洗脱体积过小 | 加大洗脱体积 | |
5.目标物在洗脱液条件下出现聚集沉淀 | 检测目标物在洗脱液条件(盐浓度和pH)下的溶解度和稳定性。 | |
目标物纯度较低
| 1.样品没有经过前处理 | 样品上柱前必须要经过离心或过滤 |
2.样品粘度过高 | 用平衡液适当的稀释样品,降低粘度。 | |
3.洗杂不彻底 | 加大洗杂体积直至基线平稳并与平衡液一致 | |
4.杂质蛋白或脂类在介质中聚集沉淀 | 及时有效地清洗介质 | |
5.洗脱条件不佳 | 优化洗脱条件 | |
6.目标物出现降解 | 检测目标物的稳定性 | |
7.柱料装填效果不佳 | 重新装填或购买 | |
8.分离柱顶部有较大储样体积 | 重新装柱或降低储样体积 | |
9.介质中有微生物生长 | 介质使用完后,请及时正确保存介质 | |
介质载量下降 | 1.上样流速过快 | 降低上样流速 |
2.蛋白或脂类在介质中聚集,导致载量下降。 | 及时清洗介质 | |
3.使用次数过多,配基被氧化或脱落 | 及时清洗介质或更换新介质 | |
色谱峰上升过陡 | 介质装填过紧 | 重新装柱 |
色谱峰上升过缓或拖尾 | 介质装填太松 | 重新装柱 |
柱床有裂缝或干涸 | 出现泄露或大体积气泡引入 | 检查管路是否有泄露或气泡,重新装柱 |
液流较慢 | 1.蛋白或脂类聚集 | 及时清洗介质或滤膜 |
2.蛋白沉淀在介质中 | 调整平衡液和洗脱液组分,以维持目标物的稳定性和介质的结合效率 | |
3.分离柱中微生物生长 | 所用试剂必须经过过滤和脱气; 样品上柱前必须离心或过滤 |
7.订购信息
表4:订购信息表
产品 | 规格 | 货号 |
PS Focurose HPL | 25ml | HQ220325025M |
PS Focurose HPL | 100ml | HQ220325100M |
PS Focurose HPL | 500ml | HQ220325500M |
PS Focurose HPL | 1L | HQ220325001L |
PS Focurose HPL | 5L | HQ220325005L |
PS Focurose HPL | 20L | HQ220325020L |
备注:大规格包装产品或其它产品购买,请咨询本公司当地销售或售前技术支持。
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