为确保产品的性能和无忧的操作，使用前请仔细阅读本手册，有任何疑问请咨询本公司售后技术支持或当地的销售人员（联系方式见附录）。

1.产品介绍

CNBr Focurose 4FF是经过溴化氰活化后含有氰酸酯基团的快流速纯化介质，适用于偶联蛋白质、多肽、核酸等含有氨基的生物分子。在生物医药纯化工艺中经过反复的验证，得到了广泛的应用。

特点：

a.应用广泛，可适用于偶联含氨基的生物类大分子。

b.多点偶联，简单、灵活、快速、有效，能高效的维持生物分子的生物学活性及稳定性。

c.流速快、产率高、易于放大。

表1：介质性能参数

*：稳定性取决于偶联的配基

2.溶液制备

A液：0.001M HCl。

B液：0.1M NaHCO3、0.5M NaCl，pH 8.3。

C液：0.1M Tris-HCl，pH 8.0。

D液：0.1M Tris-HCl、0.5M NaCl，pH 9.0。

E液：0.1M 乙酸钠、0.5M NaCl，pH 3.0。

F液：20%乙醇。

G液：0.02M Na2HPO4、0.5M NaCl， pH 7.0-7.4。

H液：0.1M Glycine-HCl，pH 2.7。

I液：1.0M Tris-HCl，pH 9.0。

3.样品制备

3.1按0.5-10mg/ml的浓度将待偶联样品溶解在B液中，也可以采用透析/超滤/G25将待偶联样品置换到B液中。

3.2样品过滤（平均粒径<45µm，用0.22µm过滤；45µm<平均粒径<165µm，用0.45µm过滤；平均粒径>165µm，用   0.8µm过滤）。

4.偶联流程

4.1取所需量的介质匀浆液至相应规格的砂芯漏斗中抽干。

4.2加入2倍介质体积的预冷A液，搅拌均匀后抽干；重复2次。

4.3将介质转移到相应规格的反应器中。

4.4将待偶联样品加入到反应器中，室温条件下温和搅拌约4h。

4.5将介质转移到砂芯漏斗中抽干，保存收集容器中偶联后的溶液。

4.6加入2倍介质体积的C液，搅拌均匀后抽干；重复2次。

4.7将介质转移到相应规格的反应器中, 加入2倍介质体积的C液, 室温条件下温和搅拌约4h。

4.8将介质转移到砂芯漏斗中抽干。

4.9加入2倍介质体积的D液, 搅拌均匀后抽干。

4.10加入2倍介质体积的E液, 搅拌均匀后抽干。

4.11重复“4.9-4.10”2次。

4.12加入2倍介质体积的F液, 搅拌均匀后抽干；重复2次。

4.13将介质转移到相应规格的容器中，加入等体积的F液后保存备用。

5.偶联效率测定

测定偶联前后溶液中样品含量（A280），计算偶联效率。

6.纯化流程（以XK16/10为例）

6.1采用液滴对液滴（避免引入气泡）的方式将柱子连接到层析系统上。

6.2用纯化水以5ml/min的流速冲洗5个CV。

6.3用G液以5ml/min的流速冲洗10个CV。

6.4将样品以5ml/min的流速上样。

6.5用G液以5ml/min的流速冲洗至紫外吸收值平稳（10-15个CV）。

6.6用H液以5ml/min的流速洗脱10CV。

6.7用纯化水以5ml/min的流速冲洗5个CV。

6.8用F液以5ml/min的流速冲洗5个CV。

7.清洗（取决于待偶联样品的稳定性）

7.1用6M盐酸胍冲洗10CV，立即用纯化水冲洗10CV。

7.2用70%乙醇冲洗10CV，立即用纯化水冲洗10CV。

7.3用F液冲洗10CV。

8.常见问题

表2：常见问题及解决方案

9.订购信息

表3：订购信息表

备注：大规格包装产品或其它产品购买，请咨询本公司当地销售或售前技术支持。