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SP Focurose HPR

价 格:询价

规 格:25ml/100ml/500ml/1L/5L/20L

产 地:中国

货 号:HL190301001L

品 牌:汇研生物


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产品概述

   为确保产品的性能和无忧的操作,使用前请仔细阅读本手册,有任何疑问请咨询本公司技术支持或当地的销售人员。

SP Focurose HPR是高耐压的强阳离子交换介质,适用于蛋白、多肽、核酸等所有带电的生物分子的分离纯化。中小颗粒设计,多应用样品的初期捕获和中度纯化。

预装柱需联合层析系统或蠕动泵或注射器使用。


1 产品介绍

特点:

a.高耐压。

b.兼顾流速性能和分辨率。。

c.高化学耐受性。

d.便于维护。

 

表1:SP Focurose HPR 性能参数

基质

高刚性琼脂糖

粒径范围

45-165µm

平均粒径

75±5µm

介质类型

强阳离子交换

带电基团

-SO3-

离子载量

0.10-0.14mmol H+/ml介质

操作压力

≤0.5MPa

流速

≥700cm/h

pH稳定性

4-12(工作)/4-12(长期)/ 3-14(短期)

化学稳定性

常用缓冲液、1.0M氢氧化钠、8M 尿素、6M 盐酸胍、70%乙醇

避免使用

氧化剂、阳离子型去污剂、阳离子型缓冲液

贮存溶液

0.2M NaAc,20%乙醇

贮存温度

4-30℃



2 选择指导

2.1 离子交换介质的选择

图1:离子交换介质的选择

说明:

a.当目标物所在溶液的pH˂目标物的等电点时,选择阳离子交换介质。

b.当目标物所在溶液的pH˃目标物的等电点时,选择阴离子交换介质。

c.所使用溶液的pH应该在离子交换介质的使用pH范围以内。

2.2 缓冲溶液的选择

表2:阴离子交换缓冲液

pH范围

缓冲盐

浓度(mM)

平衡离子

pKa(25℃)

4.3-5.3

N-Methylpiperazine

20

Cl-

4.75

4.8-5.8

Piperazine

20

Cl-或HCOO-

5.33

5.5-6.5

L-Histidine

20

Cl-

6.04

6.0-7.0

bis-Tris

20

Cl-

6.48

6.2-7.2

bis-Tris propane

20

Cl-

6.65

7.3-8.3

Triethanolamine

20

Cl-或CH3COO-

7.76

7.6-8.6

Tris

20

Cl-

8.07

8.0-9.0

N-Methyl-diethanolamine

20

SO42-

8.52

8.0-9.0

N-Methyl-diethanolamine

50

Cl-或CH3COO-

8.52

8.4-9.4

Diethanolamine

50

Cl-

8.88

8.4-9.4

Propane 1,3-Diamino

20

Cl-

8.88

8.6-9.6

bis-Tris propane

20

Cl-

9.10

9.0-10.0

Ethanolamine

20

Cl-

9.50

9.2-10.2

Piperazine

20

Cl-

9.73

10.0-11.0

Propane 1,3-Diamino

20

Cl-

10.55

10.6-11.6

Piperidine

20

Cl-

11.12


表3:阳离子交换缓冲液

pH范围

缓冲盐

浓度(mM)

平衡离子

pKa(25℃)

1.4-2.4

Maleic acid

20

Na+

1.92

2.6-3.6

Methyl malonic acid

20

Na+或Li+

3.07

2.6-3.6

Citric acid

20

Na+

3.13

3.3-4.3

Lactic acid

50

Na+

3.86

3.3-4.3

Formic acid

50

Na+或Li+

3.75

3.7-4.7

Succinic acid

50

Na+

4.21

4.3-5.3

Acetic acid

50

Na+或Li+

4.75

5.1-6.1

Succinic acid

50

Na+

5.64

5.2-6.2

Methyl malonic acid

50

Na+或Li+

5.76

5.6-6.6

MES

50

Na+或Li+

6.27

6.7-7.7

Phosphate

50

Na+

7.20

7.0-8.0

HEPES

50

Na+或Li+

7.56

7.8-8.8

BICINE

50

Na+

8.33

 

说明:

a.按照表3和表4选择缓冲溶液的种类和浓度。

b.错误的缓冲液(种类和浓度)会干扰分离效果(如分离度、载量、pH波动等)。

c.所使用缓冲液的pH应该在离子交换介质的使用pH范围内。

d.使用分析纯或者更高纯度的缓冲液。

e.在溶液配制后,须经过滤(平均粒径<45µm,用0.22µm过滤;45µm<平均粒径<165µm,用0.45µm过滤;平均粒径>165µm,用0.8µm过滤)和脱气处理(超声或负压)。

 

3 样品的制备

样品所在溶液要和平衡液保持一致,可以用平衡液稀释或透析/超滤/G25进行缓冲液置换。

样品过滤(平均粒径<45µm,用0.22µm过滤;45µm<平均粒径<165µm,用0.45µm过滤;平均粒径>165µm,用   0.8µm过滤)。

 

4 纯化流程(以XK16/10为例)

采用液滴对液滴(避免引入气泡)的方式将柱子连接到层析系统上。

用平衡液以5ml/min的流速冲洗5CV(CV指柱床体积,下同)。

用洗脱液以5ml/min的流速冲洗5CV。

用平衡液以5ml/min的流速冲洗10CV。

将样品以5ml/min的流速上样。

用平衡液以5ml/min的流速冲洗10CV。

用洗脱液以5ml/min洗脱5CV或20CV(根据前期筛选实验数据,采用阶梯式洗脱5CV/线性梯度洗脱20CV)。

用再生液以5ml/min的流速冲洗5CV。

备注:再生液=平衡液+1M NaCl,其它组分不变。


5 放大

保持柱床高度不变

5.2 保持线性流速不变

备注:若实际情况和实验室数据有偏差,可以维持停留时间不变。

 

6 维护

6.1平衡

柱子装填完成后,用平衡液以60cm/h的流速冲洗5CV或冲洗至电导和pH值恒定。

6.2再生

每次分离纯化后,用再生液以60cm/h的流速冲洗5CV或冲洗至电导和pH值恒定。

6.3在位清洗

在位清洗用于清洗再生没有清洗干净的物质,例如脂类、沉淀物、变性蛋白。

a.强离子结合蛋白

用2.0M NaCl以60cm/h的流速反向冲洗5CV。

b.沉淀物、疏水结合蛋白、脂蛋白

用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向冲洗5CV。

c.脂类、强疏水蛋白。

用1.0M NaOH,30%异丙醇以30cm/h的流速反向冲洗5CV

6.4消毒

用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向冲洗5CV。

6.5灭菌

将介质置换到0.5M NaCl ,pH 7.0的溶液中进行高压灭菌。

6.6保存

介质在0.2M NaAc 、20%乙醇中4-30℃保存。

 

7 订购信息

表4:订购信息表

产品

规格

货号

SP Focurose HPR

25ml

HL190301025M

SP Focurose HPR

100ml

HL190301100M

SP Focurose HPR

500ml

HL190301500M

SP Focurose HPR

1L

HL190301001L

SP Focurose HPR

5L

HL190301005L

SP Focurose HPR

20L

HL190301020L

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SP Focurose HPR

  • SP Focurose HPR 使用说明书

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    详细介绍:

    SP Focurose HPR是高耐压的强阳离子交换介质,适用于蛋白、多肽、核酸等所有带电的生物分子的分离纯化。中小颗粒设计,多应用样品的初期捕获和中度纯化。


SP Focurose HPR

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