为确保产品的性能和无忧的操作，使用前请仔细阅读本手册，有任何疑问请咨询本公司售后技术支持或当地的销售人员（联系方式见附录）。

1.产品介绍

ECH Focurose 4FF是将6-氨基己酸共价偶联到琼脂糖基质上制得的快流速纯化介质。它在间隔臂末端含有羧基，主要适用于偶联含有自由氨基的小分子化合物（配基）制作亲和纯化介质。

偶联反应需要在酸性条件下（酸催化）进行，加入偶联试剂（碳化二亚胺，例如EDC、CMC）可以促进游离氨基和游离羧基的缩合。

特点：

a.应用广泛，可适用于偶联含氨基的小分子化合物。

b.单点偶联，易于控制。

c.流速快、产率高、易于放大。

表1：介质性能参数

*：稳定性取决于偶联的配基

2.溶液制备

A液：0.0001M HCl。

B液：0.5M NaCl。

C液：0.1M Tris-HCl、0.5M NaCl，pH 8.3。

D液：0.1M 乙酸钠、0.5M NaCl，pH 4.0。

E液：20%乙醇。

F液：0.02M Na2HPO4、0.5M NaCl， pH 7.0-7.4。

G液：0.1M Glycine-HCl，pH 2.7。

H液：1.0M Tris-HCl，pH 9.0。

3.样品制备

3.1按50umol/ml的浓度将待偶联样品溶解在A液中，加入EDC或CMC至终浓度为0.1M，调整pH至4.5。

3.2样品过滤（平均粒径<45µm，用0.22µm过滤；45µm<平均粒径<165µm，用0.45µm过滤；平均粒径>165µm，用   0.8µm过滤）。

4.偶联流程

4.1取所需量的介质匀浆液至相应规格的砂芯漏斗中抽干。

4.2加入2倍介质体积的A液，搅拌均匀后抽干；重复2次。

4.3加入2倍介质体积的B液，搅拌均匀后抽干；重复2次。

4.4将介质转移到相应规格的反应器中。

4.5将待偶联样品加入到反应器中，室温条件下温和搅拌约24h(反应前期pH会发生变化，需要调节pH至4.5)。

4.6将介质转移到砂芯漏斗中抽干，保存收集容器中偶联后的溶液。

4.6加入2倍介质体积的C液，搅拌均匀后抽干。

4.7加入2倍介质体积的D液, 搅拌均匀后抽干。

4.8重复“4.6-4.7”2次。

4.9加入2倍介质体积的E液, 搅拌均匀后抽干；重复2次。

4.10将介质转移到相应规格的容器中，加入等体积的E液后保存备用。

5.偶联效率测定

5.1测定偶联前后溶液中样品含量（A280或其它含量测定方法），计算偶联效率。

6.纯化流程（以XK16/10为例）

6.1采用液滴对液滴（避免引入气泡）的方式将柱子连接到层析系统上。

6.2用纯化水以5ml/min的流速冲洗5个CV。

6.3用F液以5ml/min的流速冲洗10个CV。

6.4将样品以5ml/min的流速上样。

6.5用F液以5ml/min的流速冲洗至紫外吸收值平稳（10-15个CV）。

6.6用G液以5ml/min的流速洗脱10CV。

6.7用纯化水以5ml/min的流速冲洗5个CV。

6.8用E液以5ml/min的流速冲洗5个CV。

7.清洗（取决于待偶联样品的稳定性）

7.1用6M盐酸胍冲洗10CV，立即用纯化水冲洗10CV。

7.2用70%乙醇冲洗10CV，立即用纯化水冲洗10CV。

7.3用F液冲洗10CV。

8.常见问题

表2：常见问题及解决方案

9.订购信息

表3：订购信息表

备注：大规格包装产品或其它产品购买，请咨询本公司当地销售或售前技术支持。